Klebsiella oxytoca jako czynnik wywołujący antybiotykowe krwotoczne zapalenie okrężnicy ad

Szczepy oksytocy izolowane od pacjentów z krwotocznym zapaleniem okrężnicy związanym z antybiotykami i wykazano, że połowa szczepów wyizolowanych od zdrowych osobników wytwarza cytotoksynę zdolną do indukowania śmierci komórkowej w różnych hodowlach komórek nabłonkowych.2,8-10 W przeciwieństwie do C zapalenia jelita grubego wywołane przez antybiotyki, 11 jednak nie ma modelu zwierzęcego in vivo na krwotoczne zapalenie okrężnicy związane z antybiotykiem. Nie jest więc pewne, czy K. oxytoca powoduje krwotoczne zapalenie okrężnicy związane z antybiotykami, ponieważ postulaty Kocha nie zostały spełnione. Opisujemy pięciu pacjentów z krwotocznym zapaleniem okrężnicy związanym z antybiotykami. Szczep K. oxytoca wyizolowany od jednego z tych pacjentów zastosowano w zwierzęcym modelu krwotocznego zapalenia okrężnicy związanego z antybiotykiem, co pozwoliło nam spełnić postulaty Kocha.
Metody
Pacjenci i kontrole
Zbadaliśmy 22 kolejnych pacjentów, u których występowało zapalenie jelita grubego związane z antybiotykami, ale byli oni ujemni w stosunku do C. difficile. Poddano kolonoskopii diagnostycznej w okresie od marca 2001 r. Do kwietnia 2004 r. Diagnozę krwotocznego zapalenia okrężnicy związaną z antybiotykami przeprowadzono na podstawie wywiadu klinicznego (stosowanie antybiotyków przed wystąpieniem biegunki) i wyników badań endoskopowych typowych dla krwotocznego krwawienia śródkostnego. Próbki kału badano na obecność C. difficile, Campylobacter, Salmonella, Yersinia, Shigella, Escherichia coli O157 i toksyny C. difficile A. Ponadto zbadano próbki kału od pacjentów z krwotocznym zapaleniem okrężnicy związanym z antybiotykami w odniesieniu do K. oxytoca z użyciem agaru MacConkeya płytki i identyfikację bakterii przeprowadzono przy użyciu testu API 20E (bioMérieux). Aby określić częstość występowania K. oxytoca w normalnej florze jelit, przetestowaliśmy próbki kału od 385 zdrowych osób (139 pracowników i studentów Akademii Medycznej w Grazu i 246 rekrutów z armii austriackiej) na K. oxytoca. Średni wiek wszystkich zdrowych osób wynosił 24 lata (zakres od 18 do 61 lat). Wszystkie eksperymenty na ludziach zostały zatwierdzone przez lokalną kolegium ekspertów lub austriackie Ministerstwo Obrony. Pisemną świadomą zgodę uzyskano od wszystkich pacjentów i osób kontrolnych.
Test cytotoksynowy i podatność na antybiotyki
Przeanalizowaliśmy izolaty K. oxytoca od pacjentów w celu wytworzenia cytotoksyny przy użyciu wcześniej ustalonego testu na hodowlę komórek.28 Użyliśmy jako kontroli ujemnej dwóch szczepów K. oxytoca (American Type Culture Collection [ATCC] 13182 i 8724), które wcześniej wykazano, że jest nietoksyczny 8-10. Szczep wytwarzający cytotoksynę K. oxytoca, MH 43-1, służył jako kontrola pozytywna.
W celu otrzymania supernatantu hodowli z K. oxytoca, tryptyczne brzeczki sojowe zaszczepiono jedną kolonią bakteryjną i inkubowano w 37 ° C, z wirowaniem przy 150 rpm, przez 20 godzin. Hodowle bakteryjne wirowano następnie przy 20000 xg przez 10 minut w temperaturze 4 ° C, a supernatant filtrowano przez filtr membranowy o średnicy porów 0,2 urn (Iwaki).
Wytwarzanie cytotoksyny oceniano za pomocą monowarstw komórek HEp-2 (ATCC CCL-23) w 96-dołkowych płytkach do hodowli tkankowej. Po usunięciu pożywki hodowlanej 100 .l rozcieńczonego 1: przefiltrowanego supernatantu z hodowli K
[patrz też: nfz lublin czas oczekiwania na sanatorium, rectonal, ośrodek odwykowy nfz ]
[hasła pokrewne: nfz lublin czas oczekiwania na sanatorium, roślinne komórki macierzyste, okulista bez skierowania ]